簡要描述：L-929小鼠成纖維細胞種屬：小鼠；貼壁生長；生長周期：3~4天?特性 1）來源：組織：皮下結締組織；疏松結締組織及脂肪品系：C3H/An 2）形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長 3）含量：>1x106細胞數(shù) 4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 5)用途：僅供科研使用。
產(chǎn)品型號： YKLL-929
所屬分類：細胞庫
更新時間：2024-04-29
L-929小鼠成纖維細胞
L-929小鼠成纖維細胞
種屬：小鼠；貼壁生長；生長周期：3~4天
特性
1）來源：組織：皮下結締組織；疏松結締組織及脂肪品系：C3H/An
2）形態(tài)：成纖維細胞，貼壁生長
3）含量：>1x106細胞數(shù)
4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5)用途：僅供科研使用。
二．細胞的培養(yǎng)：
1）準備MEM培養(yǎng)基；馬血清10%；雙抗，1%。該細胞不能用胎牛血清培養(yǎng)。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%馬血清或培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
三．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加入0.25％（w/v）ydbm-0.53mMEDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。
四、運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
?。?）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
五、細胞接收后的處理
1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系質(zhì)粒載體網(wǎng)。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
六、應用
用于羊棲菜多酚分離純化及對小鼠成纖維細胞抗紫外損傷影響研究
運用Folin-Ciocalteu比色法對羊棲菜多酚含量進行測定,并對該方法進行了優(yōu)化;然后利用酶輔助提取法對羊棲菜多酚進行提取,并對提取條件進行了優(yōu)化;采用大孔吸附樹脂法對羊棲菜多酚進行分離純化,并對純化條件進行了優(yōu)化以獲得高純度的羊棲菜多酚,另外測定了其體外抗氧化能力。
通過羊棲菜多酚對UV照射的小鼠成纖維細胞的保護作用、修復作用及細胞內(nèi)有關抗氧化酶的變化,研究了羊棲菜多酚對小鼠成纖維細胞抗紫外損傷的影響,為羊棲菜多酚在抗紫外損傷方面的應用提供了一定的理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。
為了明確羊棲菜多酚對UV照射的小鼠成纖維細胞抗紫外損傷的影響,研究了UV輻射劑量、羊棲菜多酚濃度及時間對細胞生長的影響,結果表明UV輻射劑量越大,小鼠成纖維細胞受到抑制越嚴重,UV輻射劑量為0.15J/cm2時zjj半致死劑量,作為后續(xù)實驗的UV照射劑量;羊棲菜多酚對小鼠成纖維細胞的保護作用隨多酚濃度的增大呈現(xiàn)先增強后減弱的趨勢,在羊棲菜多酚濃度為90μg/mL時保護作用zq。
從時間上看,加入羊棲菜多酚后培養(yǎng)4h再進行UV照射,保護作用zmx,隨著時間的延長,保護作用開始下降。羊棲菜多酚對UV照射的小鼠成纖維細胞的修復作用,同樣隨著羊棲菜多酚濃度的增大呈先增強后減弱的趨勢,在80μg/mL濃度時修復作用達到zq。此外,羊棲菜多酚能增強UV照射的小鼠成纖維細胞內(nèi)超氧化物歧化酶和gggt過氧化物酶的活性,并降低丙二醛的含量。
