Calu-3人肺腺癌細胞(胸水)Calu-3人肺腺癌細胞(胸水)
種屬：人；貼壁生長；生長周期：3~4天
收貨處理方法:
貼壁生長的細胞:
1、貼壁生長的細胞用T25細胞培養(yǎng)瓶發(fā)貨,收到細胞后,拆開包裝T25瓶的自封袋,不拆封口膜,表面噴75%酒精消毒。
2、消毒后用顯微鏡觀察細胞狀態(tài),并拍下細胞照片。
3、將細胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上,平衡是為了讓細胞盡快適應培養(yǎng)箱環(huán)境。
4、平衡后將T25瓶中培養(yǎng)基吸出用離心管裝好備用。
5、如細胞密度高于80%,可以直接消化傳代,相反則加入5-6mL培養(yǎng)基放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)即可。
懸浮生長的細胞:
1、懸浮細胞發(fā)貨復蘇后用離心管發(fā)貨,拆開包裝離心管的自封袋,不拆封口膜,表面噴75%酒精消毒。
2、然后用顯微鏡觀察細胞狀態(tài)。
3、將細胞放入37度培養(yǎng)箱平衡兩小時以上。
4、平衡完成后,離心(1000rpm,3min)收集細胞,棄上清。
5、用新的培養(yǎng)基重懸細胞并接種至培養(yǎng)瓶或皿中,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
培養(yǎng)步驟：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消
3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
2、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法三：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
1）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量YM，細胞變圓脫落后，進行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數量加入到凍存液中。
